藍(lán)白斑篩選時三種情況的原因為X~gal涂得過少或IPTG加得不足;顯色的時間可能不夠,延長時間或放入低溫冰箱可加強(qiáng)顯色;連接產(chǎn)物里面空載的載體本來就極少,這可能是主要原因。
藍(lán)白斑篩選是重組子篩選的一種方法,是根據(jù)載體的遺傳特征篩選重組子,如α-互補(bǔ)、抗生素基因等。一般在通過人工接入外部基因后,突變了的大腸桿菌的β半乳糖苷酶基因會被插入的外源基因切斷,導(dǎo)致不能轉(zhuǎn)化成完整的β半乳糖苷酶,所以無法對X~gal進(jìn)行再次切割,所以菌落顯現(xiàn)為白色。